аЯрЁБс>ўџ (*ўџџџ'џџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџьЅС@ №ПPbjbjюFюF "Œ,Œ,PџџџџџџˆЬЬЬЬЬЬЬрФФФФ арьЖ№№№№№ЫЫЫkmmmmmm$ЂRєŠ‘ЬЏЫЫЏЏ‘ЬЬ№№лІЛЛЛЏ^Ь№Ь№kЛЏkЛЛ:Џ ,ЬЬ7№ф тЎРуФФ Žл kМ0ьх R~›~7ррЬЬЬЬ~Ь74Ы"эЛ–ЫЫЫ‘‘ррфФБ ррФWestern Blot Protocol: Transfer 1) Make 1X transfer buffer: Combine 100 mL 10X transfer buffer (in carboy, 1033), 200 mL Methanol and 700 mL cold deionized water 2) Prepare the membrane – to use PVDF, soak membrane for 15s in Methanol, 1m in water, then 2 m in 1X transfer buffer. To use nitrocellulose, soak in 1X transfer buffer for 2 m. 3) Soak filter paper and sponges in 1X transfer buffer 4) Assemble the transfer sandwich as follows: black side of transfer cartridge sponge filter paper gel membrane filter paper sponge white side of transfer cartridge 5) Place cartridge in transfer apparatus (black side of cartridge toward black side of apparatus). Put ice container (in freezer in 1038) in other side of apparatus. 6) Transfer for 1.5 hours at 100 mV Western 1) Make 5% non-fat milk in TBST (in carboy, 1033) 2) Block for 1 hour at room temperature with shaking (or overnight at 4 degrees) 3) Incubate with primary (anti-rac, in -20 antibody box in freezer, 1038, dilute 1:1000 in 5% milk:TBST) for 1 hour at room temperature with shaking (or overnight at 4 degrees) 4) Wash blot with TBST 3 times: 1st wash for 10 min, 2nd two washes for 5 min 5) Incubate with anti-mouse HRP conjugated secondary antibody (in cold room, 4 degree antibody box, dilute 1:5000 in 5% milk:TBST) for 1 hour at room temperature 6) Wash blot with TBST 4 times, 15 min each wash 7) Develop: incubate blot with equal volumes of ECL reagent 1 and ECL reagent 2 for 1 min, wrap in Saran, take to dark room Stripping blot 1) Incubate with stripping reagent for 15 min at room temperature 2) Wash 3X with TBST 3) Block as above !ё ђ ў  ­ ь [ ] p r Ы ) * и ч PїяїчупузупуЯуЯупупЧпhќ9Žhќ9Ž>*hchІhchІH*hќ9ŽhchІ>*hќ9ŽhchІhchІhchІ>*hлfh40є5hлfhchІ5!ЃV  Л м у № є §  2 й § ў  8 ‰ : ˆ * [ з и §§§§§§§єєєєєєєє§§§§яяяяяяяяgdchІ„ ^„ gdchІPўи ч )>Pњѕѕѕgdќ9ŽgdchІ 1hАа/ Ар=!А"А# $ %Аœ@@ёџ@ NormalCJ_HaJmH sH tH DAђџЁD Default Paragraph FontRiѓџГR  Table Normalі4ж l4жaі (kєџС(No ListdўOђd 40єStyle Body Text + Not Bold2„аdрЄ`„а2B@2 40є Body TextЄxPџџџџ!ЃVЛму№є§ 2й§ў8‰:ˆ*[зич)>R˜0€€˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€˜0€€˜0€€˜0€€x˜0€€0˜0€€˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€x˜0€€0˜0€€x˜0€€ €˜0€€0˜0€€ €˜0€€0˜0€€€˜0€€€˜0€€€˜0€€ €Pи P P №8№@ёџџџ€€€ї№’№№0№( № №№B №S №ПЫџ ?№џџАбАќЯ,,R00R9*€urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags€State€9*€urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags€place€ IKwy‹“œЈЋч№ RЛРмтущ№ѓєќ§ ы№ ХЩR33333333333иORRWz•;ЄєжкџџџџџџџџџYvк№_џџџџџџџџџ„а„˜ўЦа^„а`„˜ўo()€ „ „˜ўЦ ^„ `„˜ў‡hˆH.‚ „p„LџЦp^„p`„Lџ‡hˆH.€ „@ „˜ўЦ@ ^„@ `„˜ў‡hˆH.€ „„˜ўЦ^„`„˜ў‡hˆH.‚ „р„LџЦр^„р`„Lџ‡hˆH.€ „А„˜ўЦА^„А`„˜ў‡hˆH.€ „€„˜ўЦ€^„€`„˜ў‡hˆH.‚ „P„LџЦP^„P`„Lџ‡hˆH.„а„˜ўЦа^„а`„˜ўo()€ „ „˜ўЦ ^„ `„˜ў‡hˆH.‚ „p„LџЦp^„p`„Lџ‡hˆH.€ „@ „˜ўЦ@ ^„@ `„˜ў‡hˆH.€ „„˜ўЦ^„`„˜ў‡hˆH.‚ „р„LџЦр^„р`„Lџ‡hˆH.€ „А„˜ўЦА^„А`„˜ў‡hˆH.€ „€„˜ўЦ€^„€`„˜ў‡hˆH.‚ „P„LџЦP^„P`„Lџ‡hˆH.YWz•;џџџџџџџџџџџџ                  хлfЪqЋ1wќ9ŽchІпwЏ40єџ@€˜єŒœœPP@џџUnknownџџџџџџџџџџџџG‡z €џTimes New Roman5€Symbol3& ‡z €џArial"qŒ№аhZ„Œ†k„Œ†ё_ ё_ !№ ДД24dMM3ƒQ№H)№џ?фџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџ40єџџWestern Blot Protocol: Marielle Yohe Marielle Yohe  ўџр…ŸђљOhЋ‘+'Гй0ˆ˜ИФмшє ( D P \hpx€фWestern Blot Protocol:estMarielle YoheroariariNormaleMarielle Yohero2riMicrosoft Word 10.0@`4<@Œ<8ОуФ@24˜РуФё_ўџеЭеœ.“—+,љЎ0 hp”œЄЌ ДМФЬ д їфКкСЯЭј CH School of Medicineo M: Western Blot Protocol: Title ўџџџўџџџўџџџ !"#$%&ўџџџ§џџџ)ўџџџўџџџўџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџRoot Entryџџџџџџџџ РFАОяЎРуФ+€1Tableџџџџџџџџ ’WordDocumentџџџџџџџџ"SummaryInformation(џџџџDocumentSummaryInformation8џџџџџџџџџџџџCompObjџџџџџџџџџџџџjџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџўџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџўџ џџџџ РFMicrosoft Word Document MSWordDocWord.Document.8є9Вq