邢唷��>� 35���2������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������欹�5@ ��� bjbj󒦮 "璛璛��������������������, ���, , , , ,    +------$�R��Q�     Q��, , �f� � �  j�, �, +�  +� � � W ��� , `h痡e��q "o +|0�w ,�� �� ��������� �  �      QQ���<�� ��<Protocol for small scale solubility test for His-tagged proteins Inoculate 3-5 ml of LB with appropriate antibiotic with 50-150(l of overnight culture of your construct. Grow cells to OD600 ~ 0.6-0.8 and induce with 0.02-0.1mM IPTG. Take a sample of uninduced cells using formula*. Incubate at appropriate induction temperature (27(C ??) for 2-4 hrs. Spin 1.5 ml in eppendorf tube. Resuspend the cell pellet in 1 ml of lysis buffer**. Incubate 20 min at room temperature. Spin 10 min at max speed in bench-top centrifuge at 4(C. Add 50(l Ni-NTA beads (Amersham) washed with your N1 buffer to the SN, incubate 10-15 min at 4(C. Resuspend the pellet in 50(l 2X BJ, save the sample for the gel Spin the beads briefly (5-10 sec), wash with N1, spin again. Add 50(l of 2 X BJ with fresh DTT in it to the beads, boil and and load on SDS gel next to pellet sample. * 400/ OD600 = number of (l to be spun and resuspended in 55(l 1 X BJ. Load 12(l on SDS gel. ** Each ml of lysis buffer contains N1 + 30(l of Bug Buster (Novagen) -- above Sveta抯 bench 20(l of 10mg/ml lysozyme -- 揗iscellaneous� box at -20(C 2(l of 2U/(l DNase I -- 揗iscellaneous� box at -20(C 100(l 10X DNase buffer -- 10爉M燭ris-HCl pH 7.6 25爉M燤gCl2 0.5爉M燙aCl2 (89@AB������� 5 ? N O  € � � � � � � �        * 蹶哧踣辛缎珶袛袎衶袛袛o攐攐攐`o斄稊 j梆h�+6hfS35丆JaJh�+6hfS35丆JaJ j梆h�+6h(R�CJaJh�+6h�RCJaJh�+6hfS3CJaJh�+6h5J�CJH*aJh�+6h5J�CJaJh�+6he<�CJaJ jm�he<�CJOJQJaJh�+6h(R�CJaJh(R�h�+6h�+6CJ aJ h�+6hfS3CJ aJ h�+6h(R�CJ aJ #ABCD� � �  w � � _ ` a b c d e f g � �  J � ��������������������������gd5J� & Fgd�R & FgdfS3 & Fgd(R�� �* 5 d r s u w � � � � � � � � � � � � � � � � ^ _ ` a c d p t � 嵋崞滑』櫥韹韮韮韝x韝ph]xQxh�+6h5J�CJH*aJh�+6h+&$CJaJh+&$CJaJh5J�CJaJh�+6h5J�CJaJh1]kCJaJh�+6hfS35�>*颁闯补闯丑╢*颁闯补闯丑�+6丑别<�CJaJ jm�he<�CJOJQJaJh�+6h�RCJaJh�+6h5J�5丆JaJ j梆h�+6hfS35丆JaJh�+6hfS35丆JaJh�+6hfS3CJaJh蒏�CJaJ� � � � � � � � � � � �   % I J U V W k y z € � � � � � � � � � � 矜褊嬗骜鬯胬咐褊腊胬褊腊òò潖潎tl] jm�h:CJOJQJaJh:CJaJh�+6h:CJaJhaJpCJaJh� �CJaJ j梆h� �h� �CJaJh� �h� �CJaJh$1�CJaJh� �CJaJha`�CJaJh�+6h� �CJaJh�+6CJaJhrCJaJh�+6he<�CJaJh�+6h5J�CJaJ jm�he<�CJOJQJaJ$� � � � � � � � � � � � �    # $ * + , A � � � � � � � � � � � � 蹴蹀踔沃蚊得无跷瓙儁儛b儁儛b僕h$1�h:CJaJ,h$1�h$1�0JB*CJH*OJQJ^Jph�h�$LCJ^JaJh$1�h$1�CJ^JaJ)h$1�h$1�0JB*CJOJQJ^Jph�h鬺`CJaJh�$LCJaJ j梆h� �h:CJaJh� �h:CJaJh:CJaJh$1�CJaJ jm�h:CJOJQJaJhSn�CJaJh�+6h:CJaJ"� � � � ���gd5J�gd:� � �h�+6h0CJaJ 1恏靶/ 班=!�"�#悹$悹%��@@�@ NormalCJ_HaJmH sH tH DA@��D Default Paragraph FontRi��R  Table Normal�4� l4�a� (k��(No ListP﨩��P $1� bodycopy1%7€>*CJOJQJS*€Y(aJo(ph�����ABCD���w��_`abcdefg��J�����0€€€�0€€€�0€€€�0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€� 0€€€� 0€€€�0€€p�0€€�0€€��0€€ €�0€€ €�0€€p�0€€ €�0€€ €�0€€€�0€€ €�0€€€�0€€ €�0€€€�0€€�0€€�0€€ABCD���w��_`abcdefg��J�����0€€€�0€€€�0€€€�0€€€� 0€€€� 0€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€楡0€€€O900€欯0€€€�0€€€* � � � �  � �  � �8�@����€€€�饞��0�( � �養 �S ���� ?�+3���� /12:�����WZw��3w�������svetal99i5軻$#p,���������勑剺���^勑`剺�5o(.€ 劆剺���^劆`剺䥽h圚.� 刾凩��p^刾`凩�噃圚.€ 凘 剺��@ ^凘 `剺䥽h圚.€ �剺��^�`剺䥽h圚.� 勦凩���^勦`凩�噃圚.€ 劙剺���^劙`剺䥽h圚.€ 剙剺��€^剙`剺䥽h圚.� 凱凩��P^凱`凩�噃圚.i5軻��������軕        �峉0+&$╢*fS3�+6:e<��$L�R鬺`kaOsg1]kaJpr5J�Sn�� �� �蒏�UQ�5�譎�飢�a`�$1�(R��@€��臒A���`@��Unknown������������G�噝 €�Times New Roman5�€Symbol3&� 噝 €�Arial7&� � �Verdana"q�鹦hY矅喿儝f顐寙_� � $����亖24d��3僎�H)p�?����������������������(R���G Protocol for small scale solubility test for His-tagged proteinssvetal99svetal99 �鄥燆鵒h珣+'迟0�����(8 LX t € � ������H Protocol for small scale solubility test for His-tagged proteins  svetal99otovetvetNormal9 svetal99oto28tMicrosoft Word 10.0@鷙E @斻笌隳@茰o�@jOe���胀諟.摋+,04 hp€��� ���� � �黑料网-CH �A H Protocol for small scale solubility test for His-tagged proteins Title ������ !���#$%&'()���+,-./01������4�������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������Root Entry�������� �F@O籮e�6€Data ������������1Table�����WordDocument����"SummaryInformation(������������"DocumentSummaryInformation8��������*CompObj������������j���������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� ���� �FMicrosoft Word Document MSWordDocWord.Document.8�9瞦