邢唷��>� 35���2������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������欹�5@ ���
bjbj "璛璛��������������������, ���, , , , ,
+------$�R��Q�
Q��, , �f�
�
�
j�, �, +�
+�
�
�
W
���
, `h痡e��q
"o
+|0�w
,��
��
���������
�
�
QQ���<��
��<Protocol for small scale solubility test for His-tagged proteins
Inoculate 3-5 ml of LB with appropriate antibiotic with 50-150(l of overnight culture of your construct.
Grow cells to OD600 ~ 0.6-0.8 and induce with 0.02-0.1mM IPTG. Take a sample of uninduced cells using formula*.
Incubate at appropriate induction temperature (27(C ??) for 2-4 hrs. Spin 1.5 ml in eppendorf tube.
Resuspend the cell pellet in 1 ml of lysis buffer**. Incubate 20 min at room temperature.
Spin 10 min at max speed in bench-top centrifuge at 4(C.
Add 50(l Ni-NTA beads (Amersham) washed with your N1 buffer to the SN, incubate 10-15 min at 4(C.
Resuspend the pellet in 50(l 2X BJ, save the sample for the gel
Spin the beads briefly (5-10 sec), wash with N1, spin again.
Add 50(l of 2 X BJ with fresh DTT in it to the beads, boil and and load on SDS gel next to pellet sample.
* 400/ OD600 = number of (l to be spun and resuspended in 55(l 1 X BJ.
Load 12(l on SDS gel.
** Each ml of lysis buffer contains
N1 + 30(l of Bug Buster (Novagen) -- above Sveta抯 bench
20(l of 10mg/ml lysozyme -- 揗iscellaneous� box at -20(C
2(l of 2U/(l DNase I -- 揗iscellaneous� box at -20(C
100(l 10X DNase buffer -- 10爉M燭ris-HCl pH 7.6 25爉M燤gCl2 0.5爉M燙aCl2
(89@AB������� 5 ? N O € � � � � � � �
*
蹶哧踣辛缎珶袛袎衶袛袛o攐攐攐`o斄稊 j梆h�+6hfS35丆JaJh�+6hfS35丆JaJ j梆h�+6h(R�CJaJh�+6h�RCJaJh�+6hfS3CJaJh�+6h5J�CJH*aJh�+6h5J�CJaJh�+6he<�CJaJ jm�he<�CJOJQJaJh�+6h(R�CJaJh(R�h�+6h�+6CJ aJ h�+6hfS3CJ aJ h�+6h(R�CJ aJ #ABCD� � �
w
�
�
_`abcdefg��J���������������������������gd5J�
&Fgd�R
&FgdfS3
&Fgd(R��
�*
5
d
r
s
u
w
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
^_`acdpt�嵋崞滑』櫥韹韮韮韝x韝ph]xQxh�+6h5J�CJH*aJh�+6h+&$CJaJh+&$CJaJh5J�CJaJh�+6h5J�CJaJh1]kCJaJh�+6hfS35�>*颁闯补闯丑╢*颁闯补闯丑�+6丑别<�CJaJ jm�he<�CJOJQJaJh�+6h�RCJaJh�+6h5J�5丆JaJ j梆h�+6hfS35丆JaJh�+6hfS35丆JaJh�+6hfS3CJaJh蒏�CJaJ������������
%IJUVWkyz€����������矜褊嬗骜鬯胬咐褊腊胬褊腊òò潖潎tl] jm�h:CJOJQJaJh:CJaJh�+6h:CJaJhaJpCJaJh� �CJaJ j梆h� �h� �CJaJh� �h� �CJaJh$1�CJaJh� �CJaJha`�CJaJh�+6h� �CJaJh�+6CJaJhrCJaJh�+6he<�CJaJh�+6h5J�CJaJ jm�he<�CJOJQJaJ$�������������
#
$
*
+
,
A
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
蹴蹀踔沃蚊得无跷瓙儁儛b儁儛b僕h$1�h:CJaJ,h$1�h$1�0JB*CJH*OJQJ^Jph�h�$LCJ^JaJh$1�h$1�CJ^JaJ)h$1�h$1�0JB*CJOJQJ^Jph�h鬺`CJaJh�$LCJaJ j梆h� �h:CJaJh� �h:CJaJh:CJaJh$1�CJaJ jm�h:CJOJQJaJhSn�CJaJh�+6h:CJaJ"���
�
���gd5J�gd:�
�
�h�+6h0CJaJ 1恏靶/ 班=!�"�#悹$悹%��@@�@NormalCJ_HaJmH sH tH DA@��DDefault Paragraph FontRi��RTable Normal�4�
l4�a�(k��(No ListP﨩��P$1� bodycopy1%7€>*CJOJQJS*€Y(aJo(ph�����ABCD���w��_`abcdefg��J�����0€€€�0€€€�0€€€�0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€� 0€€€� 0€€€�0€€p�0€€�0€€��0€€ €�0€€ €�0€€p�0€€ €�0€€ €�0€€€�0€€ €�0€€€�0€€ €�0€€€�0€€�0€€�0€€ABCD���w��_`abcdefg��J�����0€€€�0€€€�0€€€�0€€€� 0€€€� 0€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€� 0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€�0€€€楡0€€€O900€欯0€€€�0€€€*
���
�
��
�
�8�@����€€€�饞��0�( �
�養
�S���� ?�+3����/12:�����WZw��3w�������svetal99i5軻$#p,���������勑剺���^勑`剺�5o(.€
劆剺���^劆`剺䥽h圚.�
刾凩��p^刾`凩�噃圚.€
凘剺��@^凘`剺䥽h圚.€
�剺��^�`剺䥽h圚.�
勦凩���^勦`凩�噃圚.€
劙剺���^劙`剺䥽h圚.€
剙剺��€^剙`剺䥽h圚.�
凱凩��P^凱`凩�噃圚.i5軻��������軕 �峉0+&$╢*fS3�+6:e<��$L�R鬺`kaOsg1]kaJpr5J�Sn�� �� �蒏�UQ�5�譎�飢�a`�$1�(R��@€��臒A���`@��Unknown������������G�噝 €�Times New Roman5�€Symbol3&�噝 €�Arial7&�� �Verdana"q�鹦hY矅喿儝f顐寙_�
�
$����亖24d��3僎�H)p�?����������������������(R���G Protocol for small scale solubility test for His-tagged proteinssvetal99svetal99�鄥燆鵒h珣+'迟0�����(8 LX
t€�
������H Protocol for small scale solubility test for His-tagged proteins svetal99otovetvetNormal9 svetal99oto28tMicrosoft Word 10.0@鷙E
@斻笌隳@茰o�@jOe���胀諟.摋+,04hp€�������
��黑料网-CH
�A
H Protocol for small scale solubility test for His-tagged proteinsTitle
������ !���#$%&'()���+,-./01������4�������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������Root Entry�������� �F@O籮e�6€Data
������������1Table�����WordDocument����"SummaryInformation(������������"DocumentSummaryInformation8��������*CompObj������������j����������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������
���� �FMicrosoft Word Document
MSWordDocWord.Document.8�9瞦